2018.11.17.,szombat
mod_vvisit_countermod_vvisit_countermod_vvisit_countermod_vvisit_countermod_vvisit_countermod_vvisit_countermod_vvisit_counter
Ma:115
Tegnap:101
Ezen a héten:898
Ebben a hónapban:2556
Összesen:682119

Csenki Zsolt: Oocyta transzplantáció, és mikromanipuláció zebradánió (Danio rerio) oocytákon

Csenki Zsolt: Oocyta transzplantáció, és mikromanipuláció zebradánió (Danio rerio) oocytákon

Csenki Zsolt 1), Andreas Zaucker 2) 3), Kovács Balázs 4), Lefler Kinga Katalin 1), Hegyi Árpád 1), Müller Tamás 1), Kovács Róbert 1), Yavor Hadzhiev 2) 3), Urbányi Béla 1), Müller Ferenc 2) 3), Váradi László 1)
1) Szent István Egyetem, Mezőgazdaság- és Környezettudományi Kar, Környezet- és Tájgazdálkodási Intézet, Halgazdálkodási Tanszék, Gödöllő
2) Institute of Toxicology and Genetics Forschungszentrum, Karlsruhe
3) Department of Medical and Molecular Genetics Division of Reproductive and Child Health Institute of Biomedical Research, University of Birmingham, Birmingham
4) Szent István Egyetem, Környezetipari Regionális Egyetemi Tudásközpont, Gödöllő


Kivonat

Az emlősöknél széleskörűen elterjedt és hatékony petesejt manipulációs módszerek (transzgén injektálás, mélyhűtéses tárolás) a halikrákon az ikra magas sziktartalma és vastag ikrahéj nem, vagy nehezen alkalmazhatók. Új lehetőségeket nyújthatnak a korai fejlődési állapotú oocytákon végezhető módszerek. Sikeres oocyta transzplantáció alkalmazásával, kiküszöbölhetők az ikrák felépítéséből adódó hiányosságok, könnyen vizsgálhatóak lehetnek az oocytában illetve az ikrában lezajló folyamatok, az anyai hatások.
Eddigi vizsgálatink során már sikerült egyértelműen bizonyítanunk, hogy a bejuttatott oocyták beépülnek a recipiens petefészekbe, és ott életben maradnak, egy részük tovább is fejlődik.
A mostani kísérleteink célkitűzése ezért az volt, hogy fiatal fejlődési állapotú (szikfelhalmozás előtti, de még jól látható sejtmaggal rendelkező) oocyták "nevelő"-anyába juttatása után, nyerhető-e termékenyítésre alkalmas ikra, illetve lehetséges-e mikroinjektálni az oocytákat, valamint a különböző bejuttatott nukleinsavak (DNS, mRNS, siRNS) működnek-e az oocytában.
Vizsgálataink során zebradánió (Danio rerio) fajon végeztünk intraspecifikus átültetéseket. Eddigi vizsgálataink is ezen a halfajon történtek, mert viszonylag rövid idő alatt ivaréretté válnak az egyedek, az ivarsejtek fejlődése gyors. Egy alkalommal átlagosan 100 db szikfelhalmozódás előtti oocytát transzplantáltunk a nevelőanyákba. Az átültetések nyomonkövetésére markerként transzgenikus (β-aktin YFP jelölésű) zebradánió oocytákat használtunk. A transzplantált anyákat hetenként szaporítottuk, majd fluoreszceins mikroszkóp alatt vizsgáltuk az embriókat, a termékenyülés utáni második napon.
A mikromanipulációhoz II-III-as típusú oocytákat használtunk. Az injektálás után az oocytákat nevelő anyákba ültettük, majd a következő napon fluoreszceins mikroszkóp alatt vizsgáltuk a transzplantált petefészket.
A vizsgálataink alapján elmondható, hogy a transzplantált oocytákból nyerhető termékenyítésre alkalmas ikra (az összes transzplantált oocyta 0,07%-a), illetve életképes embrió. Az oocyták mikroinjektálással manipulálhatóak, a bejuttatott nukleinsavak működnek a kezelt oocytákban.
 



Az előadás anyaga PDF formátumban